Traumurlaub wird zu Horrortrip. Das Luxushotel, in das Luigi, Mario und ihre Freunde eingeladen wurden, entpuppt sich als Falle, in der König Buu Huu die Reisegefährten fangen will. Ausgerechnet der hasenfüssige Luigi muss sich wieder mit Professor I. Gidd zusammentun, um das ominöse Spukhotel zu durchstreifen und seine Freunde zu retten. Aber zum Glück hat er das neueste Modell des Schreckweg F-Lu dabei, mit dem er die Gespenster besiegen oder seinen grünen Doppelgänger Fluigi herbeirufen kann. Dieser glibberige Geselle hilft ihm, auch scheinbar unüberwindliche Hindernisse zu nehmen.